Kro I

5,500.00 22,000.00 

  • CNY: 84.36 ¥ - 337.45 ¥

MD ДНК эндонуклеаза Kro I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.

  • Концентрация: 1000 е.а./мл
  • Сайт узнавания: G↑C(5mC)GGC / CGG(5mC)C↓G
  • Источник: Kocurea rosea 307
  • Оптимальный буфер: SE-буфер G
  • Оптимальная температура: 37
  • Температура инактивации, 20 мин при: 65
Артикул: E541 Категория:

Описание

Сайт узнавания:

G↑C(5mC)GGC
CGG(5mC)C↓G

Источник: Kocurea rosea 307

Определение единицы активности:

За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое дляполного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pMHpaII1/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Определение активности KroI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHpaII1/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности).
После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.
Дорожки:
1 и 6 – 1 Kb SE ДНК-маркеры.
2 – исходная ДНК , pMHpaII1/DriI
3 – 0.5 мкл Kro I
4 – 1 мкл Kro I
5 – 2 мкл Kro IПродукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Определение активности KroI на ДНК pMHpaII1/kroi

Субстрат для определения активности:

Субстрат pMHpaII1/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHpaII1, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHpaII1 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HpaII, которая модифицирует сайт узнавания 5`-CCGG-3` с образованием
5`-C(5mC)GG-3`/3`-GG(5mC)C-5`,
и три сайта узнавания KroI
5`-GC(5mC)GGC-3`/3`-CGG(5mC)CG-5`.

Оптимальный буфер: SE-буфер G

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B G O W Y ROSE
50 100 25 50 75 100

Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин, 200 мкг/мл BSA. Хранить при -20°С.

Лигирование:

Неспецифический гидролиз:

Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Kro I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК [1] и ДНК, метилированную MspI ДНК-метилтрансферазой.

С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G.

Примечание:

Литература:

1. Чернухин В.А., Журавлева Р.О., Тарасова Г.В., Болтенгаген А.А., Акишев А.Г., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Штамм бактерии Kocuria rosea — продуцент сайт-специфической эндонуклеазы KroI. // Патент на изобретение RU 2394099 С1 (2010)
2.Дедков В.С., Речкунова Н.И., Дегтярев С.Х., Жилкин П.А., Колыхалов А.А., Верхозина В.А. Штамм бактерий Bacillus sphaericus — продуцент рестриктазы BsiI. // Авторское свидетельство SU 1784642 (1992).

Доступные варианты

АртикулРазмер фасовкиФасовкаЦена 
E541S50 е.а.5,500.00 
E542L250 е.а.22,000.00