Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CATATG | CA↑TATG |
| GTATAC | GTAT↓AC |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген FauND I из Flavobacterium aquatili ND
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 75 | 10 | 50 | 100 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% PEG сшивка более эффективна.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA (кроме E009T и E010T).
Для фасовок Turbo (E009T и E010T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
Фермент чувствителен к примесям в некоторых ДНК. Например, ДНК очищенная по стандартному минипрепаративному протоколу гидролизуется плохо.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Шевченко A.В., Беличенко O.A., Мякишева T.В., Дедков В.С., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1995).
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
