Новая ДНК-метилтрансфераза M.BstC8I образует 5`-G(m5C)NNGC-3`.Изучение чувствительности эндонуклез рестрикции к M.BstС8I–метилированию.
// Молекул. генетика, микробиол. и вирусол. № 1. с.35-40 (2012).
BstC8 I
| Название фермента | BstC8 I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | Cac8I | ||||||||||||
| Известные аналоги | Cac8I | ||||||||||||
| Артикул | SE-E305 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… GCN▼NGC …3' 3'… CGN▲NCG …5' |
||||||||||||
| Источник | Bacillus stearothermophilus C8 | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 55 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 80 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 10-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Блокируется GC метилированием: 5`-G(5mC)NNGC-3`/3`-CGNN(5mC)G-5`. | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер Y | ||||||||||||
| Примечания | При 37°С активность 50% от максимальной. | ||||||||||||
| Литература |