Pcs I

5,500.00 22,000.00 

  • CNY: 427.29 ¥ - 1,709.18 ¥

MD ДНК эндонуклеаза Pcs I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.

  • 5000 е.а./мл
  • (5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G / G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC)
  • Paracoccus carotinifaciens 3K
  • SE-буфер PcsI
  • 37
  • 65

Доступные варианты

АртикулРазмерФасовкаЦена 
E505S200 е.а.5,500.00 
  • CNY: 427.29 ¥
E506L1000 е.а.22,000.00 
  • CNY: 1,709.18 ¥

Описание

Сайт узнавания и позиция гидролиза:

(5mC)GNNNNNNN(5mC)G (5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G
G(5mC)NNNNNNNG(5mC) G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC)

Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген PcsI I из Paracoccus carotinifaciens 3K.
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pMHpySE49/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHpySE49/DriI и образование двух фрагментов ДНК.

Определение активности PcsI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHpySE49/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки:
1 и 7 – 1 Kb SE ДНК-маркеры.
2 – исходная ДНК pMHpySE49/DriI
3 – 0.25 мкл Pcs I
4 – 0.5 мкл Pcs I
5 – 1 мкл Pcs I
6 – 2 мкл Pcs IПродукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.

Субстрат для определения активности:
Плазмидная ДНК pMHpySE49, линеаризованная DriI (pMHpySE49/DriI). pMHpySE49 (3536 п.н.) получена путем лигирования вектора pMTL22/FauNDI/SmaI и
ПЦР-фрагмента, содержащего ген метилазы M.HpySE526I (образует 5′-A(5mC)GT-3′) и последовательность ДНК
5′-GACGTATAAAACGTT-3′
3′-CTGCATATTTTGCAA-5′
В результате, данный субстрат имеет оптимальный сайт PcsI:
5′-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3′
3′-TG(5mC)NNNNNNNG(5mC)A-5′
Оптимальный буфер: SE-буфер PcsI
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B G O W Y ROSE
50-75 50-75 0 10-25 50-75 50


Условия хранения
: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 100 μg/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.Лигирование:
Неспецифический гидролиз: Неспецифического гидролиза не наблюдается при обработке 1 мкг ДНК фага лямбда 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
После инкубации 5 ед фермента в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. Активность фермента зависит от нуклеотидов, фланкирующих сайт узнавания, и количества метилированных цитозинов.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер PcsI