Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CTCGAG | C↑TCGAG |
| GAGCTC | GAGCT↓C |
Источник: Streptomyces fradiae 274
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (Hind III-digest)
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 75 | 50 | 50 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 50°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием CTCGmAG, Не блокируется метилированием CTmCGAG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.
Для фасовок Turbo (E125T и E126T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
При 37°С активность 70% от максимальной.
Литература:
Пучкова Л.И., Кривопалова Г.Н., Андреева И.С., Селина A.В., Серов Г.Д., Речкунова Н.И., Дегтярев С.Х. Изв. Сиб. Отд. Акад. Наук СССР 1: 32-34 (1990).
