Расщепление двухцепочечной ДНК Экзонуклеазой III (E Coli)

Cтандартный протокол

На 20 мкл реакционной смеси (рекомендуется готовить на льду):

• SE-буфер Экзонуклеаза III (x10) – 2 мкл;
• Двухцепочечная ДНК – от 0.3 до 1 мкг;
• Вода (Milli-Q) – до конечного объема 20 мкл

__________________________

• + 1-5 единиц Экзонуклеазы III

Инкубировать в течение 0.5-1 часа при температуре 37°C.
При необходимости, инактивировать фермент прогреванием при 70°C в течение 20 мин.

Примечание:

Экзонуклеаза III E.coli катализирует последовательное отщепление мононуклеотидов из двухцепочечных ДНК в направлении 3′->5′. Фермент также обладает эндонуклеазной активностью по отношению к апуринизированной ДНК, гидролизует РНК в РНК-ДНК-гибридах и обладает 3′-фосфатазной активностью.
При работе с короткими фрагментами ДНК (например, олигонуклеотидами) необходимо уменьшить время реакции с Экзонуклеазой III до 5-10 мин и/или разбавить фермент, по крайней мере, в 5-10 раз буфером для хранения и разбавления ферментов (Cat.# B100).