Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCCAGC | CCCAG↑C |
| GGGTCG | G↓GGTCG |
Источник: Geobacillus stearothermophilus Y
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 70°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 25 | 75 | 100 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 70°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA.
Примечание:
Для достижения 100% активности следует добавлять BSA в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Дедков В.С., Михненкова Н.А., Килева Е.В., Тарасова Г.В., Гончар Д.А., Акишев А.Г., Чернухин В.А., Шкиря С.С., Дегтярев С.Х.
Новая эндонуклеаза рестрикции GsaI, неошизомер фермента BseY I, узнает последовательность ДНК 5’-CCCAGC(-1/-5)-3’. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова, Т4, №1, С. 19-24 (2008).
