Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGATC(N)4 | GGATC(N)4↑ |
| CCTAG(N)5 | CCTAG(N)5↓ |
Источник: Acinetobacter calcoaceticus W2131
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dam-)
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 50 | 100 | 30 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента около 50% фрагментов ДНК сшиваются T4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC)GGATC, GATCC.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Абдурашитов M.A., Беличенко O.A., Шевченко A.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1994)
