Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GCCNNNNNGGC | GCCNNNN↑NGGC |
| CGGNNNNNCCG | CGGN↓NNNNCCG |
Источник: Bacillus globigii
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер 2W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 50 | 75 | 25 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности
Чувствительность к метилированию: Не блокируется dсm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): GCCWGGNNGGCС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2W.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
Избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Литература:
Duncan, C.H., Wilson, G.A. and Young, F.E. J. Bacteriol. 134: 338 (1978).
