Acc65 I

Название ферментаAcc65 I
ПрототипKpnI
Известные аналогиAsp718I, Kpn I
АртикулSE-E003
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… G▼GTACC …3'
3'… CCATG▲G …5'
ИсточникAcinetobacter calcoaceticus 65
Оптимальный буферSE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10257510010100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dcm-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (dcm-)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется при перекрывании dcm-метилированием (С m CWGG) GGTA CC WGG.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo (E003T и E004T) прикладывается только буфер ROSE.
ПримечанияБольшой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Литература
  2. В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев, Н.И. Речкунова Штамм бактерий Acinetobacter calcoaceticus 65 — продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность 5′-GGTACC-3′. // Патент Российской Федерации RU2034922 (1995).
  3. Г.Г. Приходько, Н.И. Речкунова, В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев Установление субстратной специфичности эндонуклеазы рестрикции Acc65I. // Сибирский биологический журнал, Вып.1, 59-60 (1991).
// Код для некролога