AclW I

Название ферментаAclW I
ПрототипBinI
Известные аналогиAlwI, BinI, BspPI
АртикулSE-E211
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GGATC(N)4▼ …3'
3'… CCTAG(N)5▲ …5'
ИсточникAcinetobacter calcoaceticus W2131
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
75500010030
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (dam-)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 3-кратным избытком фермента около 50% фрагментов ДНК сшиваются T4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется при перекрывании dam-метилированием (G m ATC)G GATC, GATC C.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y, BSA
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Неопубликованные данные Абдурашитов M.A., Беличенко O.A., Шевченко A.В., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (1994)
// Код для некролога