Afe I

Название ферментаAfe I
ПрототипEco47III
Известные аналогиAor51HI, Eco47III, FunI
АртикулSE-E213
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияДоступна
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… AGC▼GCT …3'
3'… TCG▲CGA …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Afe I из Alcaligenes faecalis T2774
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10257575100100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (BamHI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (BamHI-digest)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента более 80% фрагментов ДНК pBR322 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Литература
  1. Неопубликованные данные Абдурашитов M.A., Килева E.В., Шевченко A.В., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные. (1994)
// Код для некролога