AspLE I

Название ферментаAspLE I
ПрототипHhaI
Известные аналогиBstHH I, CfoI, HhaI, Hin6I, HinP1I, HspA I
АртикулSE-E221
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… GCG▼C …3'
3'… C▲GCG …5'
ИсточникArthrobacter species LE3860
Оптимальный буферSE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивациине инактивируется
Активность в буферах
BGOWYROSE
10751005025100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Фермент чувствителен к CpG метилированию
Чувствительность к метилированиюБлокируется CG метилированием 5`- G(5mC)GC - 3`/3`- CG(5mC)G - 5` Не блокируется при метилировании 5`- GCG(5mC) - 3`/3`- (5mC)GCG - 5` и 5`- GCG(5mC) - 3`/3`- CGCG - 5`. Гидролизует полуметилированный по внутреннему цитозину сайт: 5`-G(5mC)GC-3`/3`-СGCG-5`
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер O. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Литература
  1. Неопубликованные данные Высоцая E.M., Гончар Д.A., Шевченко A.В., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (1998).
// Код для некролога