Неопубликованные данные
Неопубликованные данные (1992).
Bpm I
| Название фермента | Bpm I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | GsuI | ||||||||||||
| Известные аналоги | GsuI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E467 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IIGiФерменты типа IIG объединяют рестриктазную и метилтрансферазную активности в одном полипептиде и часто стимулируются AdoMet или зависят от него., Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… CTGGAG(N)16▼ …3' 3'… GACCTC(N)14▲ …5' | ||||||||||||
| Источник | Bacillus pumilus | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 37 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
| ||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA, 50% глицерин; Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG) 5'- C (5mC)TGG AG(N) 16 -3' 3'- G GA(5mC)C TC(N) 14 -5' | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер W, BSA | ||||||||||||
| Примечания | Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. | ||||||||||||
| Литература |