Bpu10 I

Название ферментаBpu10 I
ПрототипBpu10I
АртикулSE-E149
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Сайт узнавания
5'… CC▼TNAGC …3'
3'… GGANT▲CG …5'
ИсточникИз штаммов E.coli, содержащих рекомбинантные плазмиды
Оптимальный буферSE-буфер K (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM KCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
1025505025100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага Лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Сшивка лучше в присутствии 10% ПЭГ.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 1 часa при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер K
ПримечанияБольшой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности или неполному разрезанию ДНК. Рекомендуется увеличение времени инкубации вместо использования избытка фермента
Литература
  4. С.Х. Дегтярев, П.А. Жилкин, Г.Г. Приходько, Н.И. Речкунова, В.Е. Репин Определение субстратной специфичности рестриктазы Bpu10I с необычным участком узнавания. // Молекулярная биология, Т.23, Вып.4, 1051-1056 (1989).
// Код для некролога