Неопубликованные данные
Неопубликованные данные (2004).
BslF I
| Название фермента | BslF I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | FinI | ||||||||||||
| Известные аналоги | BsmFI, FaqI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E479 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… GGGAC(N)10▼ …3' 3'… CCCTG(N)14▲ …5' | ||||||||||||
| Источник | Bacillus stearothermophilus Fl | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y + BSA | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 37 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 80 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
| ||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | не проверялось | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер Y, BSA | ||||||||||||
| Примечания | Высокая концентрация фермента в реакционной смеси приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. В присутствии SAM фермент проявляет ДНК-метилтрансферазную активность, максимальную при 48°С. При наличии в в реакционной смеси 10мМ MgCl 2 рестриктазная и метилтрансферазная активности проявляются одновременно и ДНК гидролизуется специфически и полностью. При отсутствии MgCl 2 ДНК только метилируется и впоследствии устойчива к гидролизу BslFI. Фермент также расщепляет ДНК в положении 11/15 от сайта узнавания. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. | ||||||||||||
| Литература |