Bso31 I

Название ферментаBso31 I
ПрототипEco31I
Известные аналогиBsaI, BspTNI, Eco31I
АртикулSE-E285
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GGTCTCN▼ …3'
3'… CCAGAG(N)5▲ …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus 31
Оптимальный буферSE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура55 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
2575100752540
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага T7
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и около 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется Dcm-метилированием (CmCWGG) GAGA CC WGG Не блокируется GGTCT(5mC) метилированием
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер O, BSA Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE+.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. В.А. Чернухин, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Н.А. Воронцова, М.А. Абдурашитов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Эндонуклеаза рестрикции Pse31I из штамма бактерии Peribacillus species 31, изошизомер Eco31I, узнает непалиндромную последовательность ДНК 5’-GGTCTC-3’ (1/5) // ДНК-узнающие ферменты, том 2025(1), DOI: 10.26213/3034-4301.2025.4.1.001 (2025).
  2. Неопубликованные данные Шинкаренко Н.M., Лебедева Н.A., Дедков В.С., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (1999).
// Код для некролога