Bsp19 I

Название ферментаBsp19 I
ПрототипNcoI
Известные аналогиNcoI
АртикулSE-E047
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… C▼CATGG …3'
3'… GGTAC▲C …5'
ИсточникBacillus species 19
Оптимальный буферSE-буфер 2W (20 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 200 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
0105075105
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюBsp19I гидролизует полуметилированный по первому цитозину сайт 5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTACC-5` и не гидролизует метилированные сайты 5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(5mC)-5` и 5`-(4mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(4mC)-5`.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер 2W, BSA (кроме E047T и E048T). Для фасовок Turbo (E047T и E048T) прикладывается буфер 2W+.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  2. Неопубликованные данные Репин В.E., Речкунова Н.И., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные.
// Код для некролога