Bst6 I

Название ферментаBst6 I
ПрототипKsp632I
Известные аналогиEam1104I, EarI, Ksp632I
АртикулSE-E239
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… CTCTTCN▼ …3'
3'… GAGAAG(N)4▲ …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus 6
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура65 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
75755075100100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Для периода более 30 дней рекомендуется хранить при -70°C.
ЛигированиеПосле гидролиза 2-кратным избытком фермента 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и около 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 65°C.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y, BSA
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  3. Неопубликованные данные Abdurashitov, M.A., Dedkov, V.S., Kileva, E.V., Popichenko, D.V., Degtyarev, S.K Unpublished observations (2000)
// Код для некролога