BstMA I

Название ферментаBstMA I
ПрототипBsmAI
Известные аналогиAlw26I, BsmAI
АртикулSE-E291
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GTCTCN▼ …3'
3'… CAGAG(N)5▲ …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus MA
Оптимальный буферSE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура55 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
25505010075100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 100 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер W, BSA
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Неопубликованные данные Чернухин В.А., Михненкова Н.А., Килева Е.В., Мезенцева Н.В., Дедков В.С., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (2005) Абдурашитов М.А., Томилов В.Н, Чернухин В.А., Дегтярев С.Х Физическая карта расщепления эндонуклеазами рестрикции Alu повторов человека // BMC Molecular Biology 2008, 9:305 (на английском языке)
// Код для некролога