BstV2 I

Название ферментаBstV2 I
ПрототипBbvII
Известные аналогиBbsI, BbvII, BpiI, BpuAI
АртикулSE-E297
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GAAGAC(N)2▼ …3'
3'… CTTCTG(N)6▲ …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus V2
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура55 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
7575252510070
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
ПримечанияБольшой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  2. Неопубликованные данные Синичкина С.A., Дедков В.С., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (2000).
// Код для некролога