Btr I

Название ферментаBtr I
ПрототипBtrI
Известные аналогиBmgBI
АртикулSE-E277
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Сайт узнавания
5'… CAC▼GTC …3'
3'… GTG▲CAG …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus SE-U62
Оптимальный буферSE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура60 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
75751007575100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 60°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер O, BSA.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
// Код для некролога