Fae I

Название ферментаFae I
ПрототипNlaIII
Известные аналогиHin1II, Hsp92II, NlaIII, CviAII, Fat I
АртикулSE-E495
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… CATG▼ …3'
3'… ▲GTAC …5'
ИсточникFlavobacterium aquatile N3
Оптимальный буферSE-буфер FaeI (33 mM Tris-ацетат (pH 8.3 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
2550101075100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг pUC19 ДНК за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиpUC19 ДНК
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°*С.
ЛигированиеПосле гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированиюБлокируется метилированием C m ATG
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер FaeI, BSA.
ПримечанияFaeI может применяться для гидролиза ПЦР-фрагментов только после их дополнительной очистки. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  2. Неопубликованные данные Чернухин В.А., Килева Е.В., Томилова Ю.Э., Дедков В.С Неопубликованные данные (2006).
// Код для некролога