Новая эндонуклеаза рестрикции GsaI, неошизомер фермента BseY I, узнает последовательность ДНК 5’-CCCAGC(-1/-5)-3’. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова, Т4, №1, С. 19-24 (2008).
Gsa I
| Название фермента | Gsa I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | BseYI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E563 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… CCCAG▼C …3' 3'… G▲GGTCG …5' | ||||||||||||
| Источник | Geobacillus stearothermophilus Y | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 70 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | не инактивируется | ||||||||||||
| Активность в буферах |
| ||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 70°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 70°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | не проверялось | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер W, BSA. | ||||||||||||
| Примечания | Для достижения 100% активности следует добавлять BSA в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. | ||||||||||||
| Литература |