Hga I

Название ферментаHga I
ПрототипHgaI
Известные аналогиCseI
АртикулSE-E461
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GACGC(N)5▼ …3'
3'… CTGCG(N)10▲ …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Hga I из Haemophilus gallinarum
Оптимальный буферSE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
1007510255050
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг pBR322 ДНК за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиpBR322 ДНК
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизНе рекомендуется инкубация более 2 ед фермента на 1 мкг ДНК более 1 часа при 37°С
Чувствительность к метилированиюБлокируется CG метилированием
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер B.
ПримечанияНе рекомендуется инкубация более 2 ед фермента на 1 мкг ДНК более 1 часа при 37°С.
Литература
  1. С.Х. Дегтярев, В.Е. Репин, Н.А. Божко, С.Н. Щелкунов Способ получения рестриктазы Hga I // Авторское свидетельство SU1389292 (1985).
// Код для некролога