HspA I

Название ферментаHspA I
ПрототипHhaI
Известные аналогиHin6I, HinP1I, AspLE I, BstHH I, CfoI, HhaI
АртикулSE-E069
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… G▼CGC …3'
3'… CGC▲G …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген HspAI из Haemophilus species A1
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50502525100100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется CG метилированием 5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5` Гидролизует полуметилированный по первому цитозину сайт 5`-G(5mC)GC-3`/3`-CGCG-5` Не блокируется при метилировании 5`-GCG(5mC)-3`/3`-(5mC)GCG-5` и 5`-GCG(5mC)-3`/3`-CGCG-5`
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Литература
  3. Неопубликованные данные Речкунова Н.И., Приходько E.A., Шевченко A.В., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные(1994).
// Код для некролога