KroN I

Название ферментаKroN I
ПрототипNaeI
АртикулSE-E599
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… GCC▼GGC …3'
3'… CGG▲CCG …5'
ИсточникKocurea rosea56
Оптимальный буферSE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10075-10010-2525-5075-10050
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг ДНК pSXH7в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере B при 37°С за 1 час.
Субстрат для определения активностиплазмидная ДНК pSXH7 (13092 п.н.). pSXH7 получена путем лигирования вектора pUC19/BamHIи BstX2I-фрагмент а геномной ДНК бактерии Sporosarcina species9 (GC-состав 70-76%). Содержит 42 сайта узнавания KroNI
Условия хранения20mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 100 мкг/мл BSA, 7 mM 2-меркаптоэт анол, 50% глицерин Срок хранения фермента 2 года
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированиюБлокируется CG метилированием 5'-GC(5mC)GGC-3'/3'-CGG(5mC)CG-5'.
ПримечанияПосле инкубации 2 ед фермент а в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается. Для эффективного гидролиза ДНК ферментом требуется два или больше сайтов узнавания. KroNI
Литература

Публикации не найдены.

// Код для некролога