Smi I

Название ферментаSmi I
ПрототипSwaI
Известные аналогиSwaI
АртикулSE-E225
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… ATTT▼AAAT …3'
3'… TAAA▲TTTA …5'
ИсточникStreptococcus milleri S
Оптимальный буферSE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
2525100752510
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 (SspI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага Т7 (SspI-digest)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента > 95% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной T4 ДНК-лигазой в присутствии 10 % ПЭГ
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер O, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер O+.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. В.С. Дедков, Т.С. Бондарь, А.В. Шевченко, С.Х. Дегтярев Новая редкощепящая эндонуклеаза рестрикции SmiI из Streptococcus milleri узнает 5′-ATTT^AAAT-3′. // Молекулярная биология и вирусология, №1, 23-27 (2000).
  2. V.S. Dedkov, S.Kh. Degtyarev Actinobacillus and Streptococcus: producers of isoschizomers of the restriction endonucleases R.Hph I, R.Sau I, R.Nhe I, R.Mbo I and R.Swa I. // Biol. Chem., Vol. 379, 573-574, (1998). (На английском)
// Код для некролога