Vsp I

Название фермента Vsp I
Прототип VspI
Известные аналоги AseI, PshBI
Артикул SE-E139
Вариант Turbo Доступен
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Тип рестриктазы Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… AT▼TAAT …3'
3'… TAAT▲TA …5'
Источник Из штамма E.coli несущего клонированный ген VspI из Vibrio species 343
Оптимальный буфер SE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
010501002550
Определение единицы активности За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности ДНК фага лямбда
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование После гидролиза 10-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна.
Неспецифический гидролиз Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированию Блокируется метилированием ATTA m AT.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечания
Литература
  2. S.Kh. Degtyarev, E.A. Prikhodko, N.I. Rechkunova, G.G. Prikhodko, V.N. Krasnykh Biochemical characterization of Vsp I methyltransferase. // Gene, 157, 65-66 (1995). (На английском)
  3. S.Kh. Degtyarev, E.A. Prikhodko, N.I. Rechkunova, Y.A. Gorbunov Interaction of Vsp I and Tru9 I restriction endonuclease with synthetic oligonucleotides. // Biochimica et Biophysica Acta, 1172, 89-94 (1993). (На английском)
  4. S.Kh. Degtyarev, E.A. Prikhodko, G.G. Prikhodko, Y.A. Gorbunov Vsp I methylase belongs to m6A-gamma class of adenine methylases. // Nucleic Acids Research, Vol. 21, No 8., 2015 (1993). (На английском)
  5. Н.И. Речкунова, С.Х. Дегтярев и др. Способ очистки эндонуклеазы рестрикции Vsp I // Авторское свидетельство SU1641024 (1990).
  6. В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев, Н.И. Речкунова, Е.В. Жук Способ получения биомассы Vibrio species, обогащенной эндонуклеазой рестрикции Vsp I. // Авторское свидетельство SU1559704 (1989).
  7. С.Х. Дегтярев, В.Е. Репин, Н.И. Речкунова, В.Е. Чижиков, Э.Г. Малыгин, В.В. Михайлов, В.А. Рассказов Определение субстратной специфичности эндонуклеазы рестрикции VspI. // Биоорганическая химия, Т.13, № 3, 420-421 (1987).
// Код для некролога