Bso31 I

Название фермента Bso31 I
Прототип Eco31I
Известные аналоги BsaI, BspTNI, Eco31I
Артикул SE-E285
Вариант Turbo Доступен
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Тип рестриктазы Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GGTCTCN▼ …3'
3'… CCAGAG(N)5▲ …5'
Источник Bacillus stearothermophilus 31
Оптимальный буфер SE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура 55 °C
Температура инактивации 80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
2575100752540
Определение единицы активности За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности ДНК фага T7
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и около 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию Блокируется Dcm-метилированием (CmCWGG) GAGA CC WGG Не блокируется GGTCT(5mC) метилированием
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер O, BSA Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE+.
Примечания Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. В.А. Чернухин, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Н.А. Воронцова, М.А. Абдурашитов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Эндонуклеаза рестрикции Pse31I из штамма бактерии Peribacillus species 31, изошизомер Eco31I, узнает непалиндромную последовательность ДНК 5’-GGTCTC-3’ (1/5) // ДНК-узнающие ферменты, том 2025(1), DOI: 10.26213/3034-4301.2025.4.1.001 (2025).
  2. Неопубликованные данные Шинкаренко Н.M., Лебедева Н.A., Дедков В.С., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (1999).
// Код для некролога