BstKTI - новый dam-чувствительный неошизомер эндонуклеазы рестрикции MboI, способный гидролизовать полуметилированный субстрат.
// Биотехнология, №2, с. 5-10 (2006).
BstKT I
| Название фермента | BstKT I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | MboI | ||||||||||||
| Известные аналоги | BfuCI, Bsp143I, BstMB I, DpnII, Kzo9 I, MboI, NdeII, Sau3AI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E151 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… GAT▼C …3' 3'… C▲TAG …5' |
||||||||||||
| Источник | Bacillus stearothermophilus KT | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 37 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда (dam-) | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Блокируется dam-метилированием (G m ATC) 5`-G(6mA)TC-3`/3`-CT(6mA)G-5` Не блокируется CG метилированием. Гидролизует полуметилированный по аденину сайт 5`-G(6mA)TC-3`/3`-CTAG-5` | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер W | ||||||||||||
| Примечания | |||||||||||||
| Литература |