Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico
// Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
Fsp4H I
| Название фермента | Fsp4H I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | Fnu4HI | ||||||||||||
| Известные аналоги | Fnu4HI, ItaI, SatI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E095 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Доступен | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… GC▼NGC …3' 3'… CGN▲CG …5' |
||||||||||||
| Источник | Из штамма E.coli несущего клонированный ген Fsp4H I из Flavobacterium species 4H | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 37 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200ug/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 5-кратным избытком фермента 5% фрагментов ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Блокируется метилированием: 5`-G(5mC)NGC-3`/ 3`-CGN(5mC)G-5` | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. | ||||||||||||
| Примечания | |||||||||||||
| Литература |