Kpn I

Название фермента Kpn I
Прототип KpnI
Известные аналоги Acc65 I, Asp718I
Артикул SE-E079
Вариант Turbo Доступен
Высококонцентрированная версия Доступна
Тип рестриктазы Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… GGTAC▼C …3'
3'… C▲CATGG …5'
Источник Из штамма E.coli несущего клонированный ген KpnI из Klebsiella pneumonia
Оптимальный буфер SE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
1002525257550
Определение единицы активности За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности ДНК фага лямбда
Условия хранения 10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз Картина cпецифического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию Не блокируется при перекрывании Dсm-метилированием (C m CWGG) GGTA CC WGG.
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер B, BSA. Для фасовок Turbo (E079T и E080T) прикладывается буфер ROSE+
Примечания Длительная инкубация с BSA не рекомендуется. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  2. Сторонняя публикация Smith, D.I., Blattner, F.R., Davies, J. Nucleic Acids Res. 3: 343-353 (1976).
// Код для некролога