Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| TCTAGA | T↑CTAGA |
| AGATCT | AGATC↓T |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген XbaI из Xanthomonas badrii
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-/ HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dam-/HindIII-digest)
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 75 | 100 | 50 | 75 | 25 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC): TCTAGATC.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E141m, E141T и E142T).
Для фасовок Turbo (E141T и E142T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Zain, B,S., Roberts, R.J. J. Mol. Biol. 115: 249-255 (1977).
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
