Abs I

Название ферментаAbs I
ПрототипAbsI
АртикулSE-E535
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… CC▼TCGAGG …3'
3'… GGAGCT▲CC …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Abs Iиз Arthrobacter species 7М06.
Оптимальный буферSE-буфер AbsI (10 mM Tris-HCl (pH 9.0 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM KCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10-2510-250-1025-5010-2525
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг ДНК pUC19SE/DriI в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере AbsI при 37°С за 1 час
Субстрат для определения активностиpUC19SE/DriI
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 200 мкг/мл BSA, 0.05% Triton X-100, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер AbsI
ПримечанияДлительная инкубация может привести к появлению звездчатой активности.
Литература
  1. В.А. Чернухин, Ю.Э. Каширина, Ю.Э. Томилова, Д.А. Гончар, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, С.Х. Дегтярев Новая сайт-специфическая эндонуклеаза AbsI из Arthrobacter species 7М06 узнает октануклеотидную палиндромную последовательность ДНК 5’-CC^TCGAGG-3’. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова,Т2, №2, С.29-34 (2006).
// Код для некролога