Неопубликованные данные
Неопубликованные данные. (1994)
Afe I
| Название фермента | Afe I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | Eco47III | ||||||||||||
| Известные аналоги | Aor51HI, Eco47III, FunI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E213 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Доступен | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Доступна | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… AGC▼GCT …3' 3'… TCG▲CGA …5' |
||||||||||||
| Источник | Из штамма E.coli несущего клонированный ген Afe I из Alcaligenes faecalis T2774 | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 37 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (BamHI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда (BamHI-digest) | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 80% фрагментов ДНК pBR322 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | не проверялось | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер Y Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. | ||||||||||||
| Примечания | |||||||||||||
| Литература |