Ahl I

Название ферментаAhl I
ПрототипSpeI
Известные аналогиBcuI, SpeI
АртикулSE-E173
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… A▼CTAGT …3'
3'… TGATC▲A …5'
ИсточникAlteromonas haloplanktis SP
Оптимальный буферSE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивациине инактивируется
Активность в буферах
BGOWYROSE
10075252575100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага Т7
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК фага T7 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37LС.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер B, BSA (кроме E173T и E174T) Для фасовок Turbo (E173T и E174T) прикладывается только буфер ROSE.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Неопубликованные данные Мякишева T.В., Беличенко O.A., Попиченко Д.В., Дедков В.С., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (2000).
// Код для некролога