BstAF I

Название ферментаBstAF I
ПрототипAflII
Известные аналогиAflII, BfrI, BspTI, Bst98I, MspCI, Vha464I
АртикулSE-E135
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… C▼TTAAG …3'
3'… GAATT▲C …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus AF
Оптимальный буферSE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура55 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10257510025100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента около 40% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер W, BSA
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература

Публикации не найдены.

// Код для некролога