BstAP I

Название ферментаBstAP I
Прототип(ApaBI)
Известные аналогиApaBI
АртикулSE-E259
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… GCANNNN▼NTGC …3'
3'… CGTN▲NNNNACG …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus AP
Оптимальный буферSE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура60 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
25257510025100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер W
ПримечанияБольшой избыток фермента (более 5 ед на 1 мкг ДНК более 16 часов) приводит к появлению звездчатой активностиАктивность при 37°С 50% от максимальной.
Литература
  1. M.A. Abdurashitov, O.A. Belichenko, A.V. Shevchenko, V.S. Dedkov, S.Kh. Degtyarev BstAP I, an ApaB I isoschizomer, cleaves DNA at 5′-GCANNNN^NTGC-3′. // Nucleic Acids Research, Vol. 25, No 12., 2301-2302(1997).
// Код для некролога