BstEN I

Название ферментаBstEN I
ПрототипEcoNI
Известные аналогиEcoNI, XagI
АртикулSE-E103
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… CCTNN▼NNNAGG …3'
3'… GGANNN▲NNTCC …5'
ИсточникBacillus stearothermophillus EN
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура65 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50502525100100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермена около 60% фрагментов сшиваются ДНК лигазой и около 90% из них могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 65°С
Чувствительность к метилированиюНе блокируется dсm-метилированием при перекрывании (C m CWGG): CCTGG NNNAGG или CCTNNN CCAGG
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y
Литература
  1. Неопубликованные данные Абдурашитов M.A., Дедков В.С., Килева E.В., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (2000).
// Код для некролога