Fat I

Название ферментаFat I
ПрототипNlaIII
Известные аналогиCviAII, Fae I, Hin1II, Hsp92II, NlaIII
АртикулSE-E155
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… ▼CATG …3'
3'… GTAC▲ …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Fat I из Flavobacterium aquatile NL3
Оптимальный буферSE-буфер G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура55 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10100251050100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг pUC19 ДНК за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиpUC19 ДНК
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 2-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 3 ед фермента в течение 16 часов при 55°С
Чувствительность к метилированиюБлокируется метилированием m CATG
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер G.
Литература
  3. А.Г. Акишев, Н.А. Нетесова, М.А. Абдурашитов, И.В. Вихлянов, М.К. Никитин, А.Б. Карпов, С.Х. Дегтярев Оценка риска возникновения рака молочной железы и рака желудка путем определения вариантов полиморфизма 5mC/T в интроне гена KIF26B в положении хр1: 245618129 // Эпигенетическая ДНК диагностика, DOI: 10.26213/SE.2019.78.40307 (2021).
// Код для некролога