Fok I

Название ферментаFok I
ПрототипFokI
Известные аналогиBseGI, BstF5 I
АртикулSE-E247
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GGATG(N)9▼ …3'
3'… CCTAC(N)13▲ …5'
ИсточникFlavobacterium okeanokoites
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50502525100100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 2-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y.
ПримечанияИспользование более 5 единиц FokI на 1 мкг ДНК и инкубация более двух часов не рекомендуется.
Литература
  3. M.A. Abdurashitov, E.V. Kileva, N.M. Shinkarenko, A.V. Shevchenko, V.S. Dedkov, S.Kh.Degtyarev BstF5 I, an unusual isoschizomer of Fok I. // Gene, 172, 4951 (1996). (На английском)
  4. С.Х. Дегтярев, П.А. Белавин, В.Е. Репин, Э.Г. Малыгин Способ получения эндонуклеазы рестрикции Fok I из Flavobacterium okeanokoites // Авторское свидетельство SU1436160 (1988).
  5. Сторонняя публикация Sugisaki, H., Kanazawa, S. Gene 16: 73-78 (1981).
// Код для некролога