Psr I

Название ферментаPsr I
ПрототипPsrI
АртикулSE-E131
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIBiФерменты типа IIB разрезают ДНК по обе стороны от сайта узнавания, обычно вырезая короткий фрагмент ДНК, содержащий этот сайт., Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… ▼(N)7GAACNNNNNNTAC(N)12▼ …3'
3'… ▲(N)12CTTGNNNNNNATG(N)7▲ …5'
ИсточникPseudomonas stutzeri N2
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура30 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10100010030
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага Т7
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 2-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 30°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y, BSA.
ПримечанияПри 37°С активность 20% от максимальной Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Неопубликованные данные Дедков В.С., Килева E.В., Абдурашитов M.A., Гончар Д.A., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (2001).
// Код для некролога