Неопубликованные данные
Неопубликованные данные (2001).
Psr I
| Название фермента | Psr I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | PsrI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E131 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IIBiФерменты типа IIB разрезают ДНК по обе стороны от сайта узнавания, обычно вырезая короткий фрагмент ДНК, содержащий этот сайт., Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… ▼(N)7GAACNNNNNNTAC(N)12▼ …3' 3'… ▲(N)12CTTGNNNNNNATG(N)7▲ …5' |
||||||||||||
| Источник | Pseudomonas stutzeri N2 | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 30 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага Т7 | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 2-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 30°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | не проверялось | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер Y, BSA. | ||||||||||||
| Примечания | При 37°С активность 20% от максимальной Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. | ||||||||||||
| Литература |