Pst I

Название ферментаPst I
ПрототипPstI
Известные аналогиBspMAI
АртикулSE-E109
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияДоступна
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… CTGCA▼G …3'
3'… G▲ACGTC …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Pst I из Providencia stuartii
Оптимальный буферSE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
1025100252550
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер O, BSA (кроме E109T и E110T). Для фасовок Turbo (E109T и E110T) прикладывается только буфер ROSE.
ПримечанияБольшой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Ю.Н. Бойко, В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев, В.А. Виестуре, О.А. Стенгревицс Штамм бактерий Providencia stuartii - продуцент рестриктазы PstI. // Авторское свидетельство SU 1472493 (1989).
  3. Сторонняя публикация Smith, D.I., Blattner, F.R., Davies, J. Nucleic Acids Res. 3: 343-353 (1976).
// Код для некролога