Set I

Название ферментаSet I
ПрототипSetI
АртикулSE-E537
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияДоступна
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… ASST▼ …3'
3'… ▲TSSA …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген SetI из Streptomyces werraensis 37
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура55 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
25257575100100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 pmol олигонуклеотидного дуплекса указанной структуры за 1 час при 55°С в 20 μl реакционной смеси
Субстрат для определения активностиОлигонуклеотидный дуплекс
5`-CGAGTTTAT AGCT GGGCCCAAC-3`
3`-GCTCAAATA TCGA CCCGGGTTG-5`
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента около 50% фрагментов pBR322 ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y.
ПримечанияВнимание! SetI расщепляет канонический сайт и ряд других сайтов с меньшей активностью. При длительной инкубации фермент может гидролизовать ДНК до коротких олигонуклеотидов.
Литература
// Код для некролога