SfaN I

Название ферментаSfaN I
ПрототипSfaNI
Известные аналогиLweI
АртикулSE-E165
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GCATC(N)5▼ …3'
3'… CGTAG(N)9▲ …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген SfaN I из Streptococcus faecalis N
Оптимальный буферSE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
102510075025
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер O. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер O.
Литература
  2. Ю.Э. Томилова, М.А. Абдурашитов, Л.Н. Голикова, Н.А. Нетесова, С.Х. Дегтярев Клонирование, установление первичной структуры и сравнительный анализ ДНК-метилтрансфераз из систем рестрикции-модификации SfaNI и Bst19I. // Молекулярная биология, т. 38, № 6, c. 997-1004 (2004).
  4. Г.Д. Серов, С.Х. Дегтярев, Л.И. Пучкова, Л.Л. Корсун, Н.И. Речкунова Штамм бактерий Streptococcus faecalis - продуцент рестриктазы SfaNI. // Авторское свидетельство SU 1645293 (1991).
  5. О.А. Жилкина, В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев Влияние некоторых параметров культивирования на выход эндонуклеазы рестрикции SfaNI. // Прикладная биохимия и микробиология. т.27, вып.4, 486-490 (1991).
  6. О.А. Жилкина, В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев Способ получения рестриктазы SfaNI, способной узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5′-GCATC(N)5^/ 3′-CGTAG(N)9^. // Авторское свидетельство SU 1442546 (1988).
// Код для некролога