Sfr274 I

Название ферментаSfr274 I
ПрототипXhoI
Известные аналогиBssHI, PaeR7I, SlaI, StrI, TliI, XhoI
АртикулSE-E125
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… C▼TCGAG …3'
3'… GAGCT▲C …5'
ИсточникStreptomyces fradiae 274
Оптимальный буферSE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура50 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10075505075100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (Hind III-digest)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 50°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется метилированием CTCG m AG, Не блокируется метилированием CT m CGAG.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер B. Для фасовок Turbo (E125T и E126T) прикладывается только буфер ROSE.
ПримечанияПри 37°С активность 70% от максимальной.
Литература
  1. В.А. Чернухин, Ю.Э. Каширина, Ю.Э. Томилова, Д.А. Гончар, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, С.Х. Дегтярев Новая сайт-специфическая эндонуклеаза AbsI из Arthrobacter species 7М06 узнает октануклеотидную палиндромную последовательность ДНК 5’-CC^TCGAGG-3’. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова,Т2, №2, С.29-34 (2006).
  2. Д.А. Гончар, М.А. Абдурашитов, О.А. Беличенко, В.С. Дедков, Н.В. Мезенцева, Ю.Э. Томилова, С.Х. Дегтярев Новая эндонуклеаза рестрикции PspXI узнает необычную последовательность ДНК 5′-VC^TCGAGB-3′. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова, №1, С. 18-23 (2005).
  3. Л.И. Пучкова, Г.Н. Кривопалова, И.С. Андреева, А.В. Селина, Г.Д. Серов, Н.И. Речкунова, С.Х. Дегтярев Штамм Streptomyces fradiae - продуцент эндонуклеазы рестрикции Sfr274I. // Известия СО АН СССР, Серия биологических наук, вып.1, 32-34 (1990).
// Код для некролога