Sph I

Название ферментаSph I
ПрототипSphI
Известные аналогиBbuI, PaeI, SpaHI
АртикулSE-E129
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… GCATG▼C …3'
3'… C▲GTACG …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Sph I из Streptomyces phaeochromogenes
Оптимальный буферSE-буфер G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
25100757550100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E129T и E130T). Для фасовок Turbo (E129T и E130T) прикладывается только буфер ROSE.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Сторонняя публикация Fuchs, L.Y., Covarrubias, L., Escalante, L., Sanchez, S., Bolivar, F. Gene 10:39-46 (1980).
// Код для некролога