Неопубликованные данные
Неопубликованные данные (2000).
BstEN I
| Название фермента | BstEN I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | EcoNI | ||||||||||||
| Известные аналоги | EcoNI, XagI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E103 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… CCTNN▼NNNAGG …3' 3'… GGANNN▲NNTCC …5' |
||||||||||||
| Источник | Bacillus stearothermophillus EN | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 65 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 80 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 5-кратным избытком фермена около 60% фрагментов сшиваются ДНК лигазой и около 90% из них могут быть повторно расщеплены | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 65°С | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Не блокируется dсm-метилированием при перекрывании (C m CWGG): CCTGG NNNAGG или CCTNNN CCAGG | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер Y | ||||||||||||
| Примечания | |||||||||||||
| Литература |