BstF5 I

Название фермента BstF5 I
Прототип (FokI)
Известные аналоги BseGI, Fok I
Артикул SE-E031
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Тип рестриктазы Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GGATGNN▼ …3'
3'… CCTAC▲NN …5'
Источник Bacillus stearothermophilus F5
Оптимальный буфер SE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура 65 °C
Температура инактивации 80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
75502550100100
Определение единицы активности За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности ДНК фага лямбда
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C.
Лигирование После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 65°C.
Чувствительность к метилированию не проверялось
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер Y
Примечания
Литература
  2. В.А. Чернухин, Л.Н. Голикова, Д.А. Гончар, М.А. Абдурашитов, Ю.Г. Каширина, Н.А. Нетесова, С.Х. Дегтярев ДНК-Метилтрансферазы M.BstF5I-2 и M.BstF5I-4 системы рестрикции-модификации BstF5I из Bacillus stearothermophilus F5. // Биохимия, т. 68, №9 (2003).
  3. Н.А. Нетесова, Л.Н. Голикова, Л.Г. Овечкина, А.А. Евдокимов, Э.Г. Малыгин, Н.С. Гололобова, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев. Сравнительное изучение свойств ДНК-метилтрансфераз M. Bst F5I-1 и M. Bst F5I-3 системы рестиркции-модификации Bst F5I из Bacillus stearothermophilus F5. // Молекулярная биология, т. 36, № 1 , с. 136-143 (2002).
  4. Л.В. Голикова, В.В. Гуторов, А.А. Евдокимов, С.Н. Щелкунов, Д.А. Гончар, С.С. Охапкина, С.Х. Дегтярев, Н.А. Нетесова. M.BstF5-1, четвертая ДНК-метилтрансфераза системы рестрикции-модификации BstF5I из Bacillus stearothermophilius F5. // Биоорганическая химия, вып. 28, с. 84-86 (2002).
  8. S.Kh. Degtyarev, N.A. Netesova, M.A. Abdurashito, A.V. Shevchenko Primary structure and strand specificity of BstF5 I — 1 DNA methyltransferase which recognizes 5′-GGATG-3′ // Gene, 187, 217-219 (1997). (На английском)
  9. M.A. Abdurashitov, E.V. Kileva, N.M. Shinkarenko, A.V. Shevchenko, V.S. Dedkov, S.Kh.Degtyarev BstF5 I, an unusual isoschizomer of Fok I. // Gene, 172, 4951 (1996). (На английском)
// Код для некролога